Marker of the development of Ph'-negative chronic myeloproliferative diseases (CMP): qualitative assessment of the presence of somatic mutation V617F of the JAK2 gene. (PCR, quality)

 Формат выдачи результата: качественный анализ (с комментарием).
 Интерпретация результатов:

Мутация	Результаты	Комментарии
JAK2 1849G/T (617V/F)	НЕ ОБНАР.	Точечная соматическая мутация гена JAK2 (617V/F) не обнаружена.
	ОБНАР.	Обнаружена точечная соматическая мутация гена JAK2 (617V/F).

 Метод определения ПЦР.
 Исследуемый материал Цельная кровь.
 Диагностический критерий Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) для ХМПЗ. Молекулярно-генетическая диагностика.
 Миелопролиферативные заболевания (МПЗ) - заболевания, характеризующиеся избыточной пролиферацией (выработкой клеток) одного или нескольких ростков кроветворения. Нарушения возникают на уровне стволовых клеток.
 Классические Ph-негативные ХМПЗ - группа болезней, включающая в себя эритремию (истинную полицитемию, ИП), эссенциальную тромбоцитемию (ЭТ) и идиопатический миелофиброз (ИМФ). Это хронические лейкозы с поражением на уровне клетки-предшественницы гемопоэза с характерной для опухоли неограниченной пролиферацией этой клетки, потомки которой дифференцируются по всем росткам кроветворения. При этом для эритремии свойственно преобладание красного ростка, для эссенциальной тромбоцитемии - мегакариоцитов и тромбоцитов. Классические ХМПЗ и некоторые другие менее распространенные миелопролиферативные заболевания чаще всего являются приобретенными, спорадическими нарушениями гемопоэза.
 Молекулярные события, лежащие в основе патогенеза ХМПЗ, связаны с дефектами генов, которые кодируют белки, ответственные за нормальное поддержание миелопоэза. Для всех ХМПЗ характерна аномальная тирозинкиназная активность.
 Белок JAK2 принадлежит семейству нерецепторных тирозинкиназ (Janus-киназ), которое включает в себя четыре белка: JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2. Для гемопоэза особое значение среди них имеет киназа JAK2, которая осуществляет передачу сигнала не только от эритропоэтина, но и от тромбопоэтина и колониестимулирующего фактора гранулоцитов (G-CSF). Функция белков JAK заключается в том, что они служат промежуточным звеном между рецепторами на мембране клетки и сигнальными молекулами (цитокинами, факторами роста и пр. Эти молекулы, связываясь с рецепторами JAK-киназ на поверхности клетки, активируют их, что приводит к активации сигнальных путей с участием ряда белков, которые передают сигналы для транскрипции, пролиферации и дифференцировки бластных предшественников.
 При появлении соматической мутации JAK2 (1849G/T (617V/F)) эти сигналы активируются автономно, независимо от связывания цитокина со своим рецептором, что приводит к избыточной пролиферации того или иного ростка клеток. Ген JAK2 расположен в локусе 9р24.1. Соматическая мутация 1849G/T (617V/F) выражается в замене нуклеотида G→T в позиции 1849 (четырнадцатый экзон), которая в свою очередь приводит к замене фенилаланина (F) на валин (V) в 617 позиции аминокислотной последовательности белка.
 JAK2 1849G/T (617V/F) является соматической мутацией, возникающей в гемопоэтических клетках-предшественницах. Она встречается у подавляющего большинства больных ХМПЗ, что делает эту мутацию очень удобным диагностическим маркером. Наличие точечной мутации JAK2 1849G/T (617V/F) - феномен, характерный исключительно для поражений миелоидного ростка, и не описан ни для солидных опухолей, ни для опухолей лимфоидного происхождения.
 ______________________________________.
 Мутация 1849G/T (617V/F) является соматической, :
 • Возникает у человека спонтанно, а не передается по наследству от родителей.
 • Мутантный аллель выявляется в основном в виде гетерозиготного генотипа.
 • Возможно возникновение мутации через несколько лет после проведения данного анализа, следовательно, при необходимости целесообразно повторное проведение анализа.
 Таблица 1. Молекулярные аномалии, связанные с «классическими» миелопролиферативными заболеваниями.

Генетическая аномалия	Нозология	Частота, %
	Истинная полицитемия	95
	Эссенциальная тромбоцитемия	50-70
	Первичный миелофиброз	40-50

 Мутация JAK2 1849G/T (617V/F) - диагностический маркер, при помощи которого можно проводить первичную и дифференциальную диагностику ХМПЗ, а также молекулярный мониторинг минимальной остаточной болезни (количественный тест).
 Алгоритм проведения молекулярной диагностики МПЗ ( 1).
 Определение химерного онкогена вCR/ABL позволяет провести дифференциальный анализ хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ) и Ph-негативных МПЗ. Если в случае Ph-негативных МПЗ мутация JAK2 1849G/T (617V/F) не найдена, то в случае ИП следует осуществить поиск мутаций в двенадцатом экзоне гена JAK2, а в случае ЭТ и ИМФ - мутаций MPL W515L/K. В случае отрицательного результата следует исключить возможность наследственных дефектов генов VHL, EPO-R, PHD2, THPO, MPL и генов глобинов. При редких видах МПЗ, негативных по JAK2 V617F, целесообразно осуществить поиск химерных онкотирозинкиназ.
 Сейчас молекулярное исследование входит в диагностические критерии ВОЗ 2008 г., а тест на наличие мутации JAK2 стал стандартным методом диагностики ХМПЗ. Выявление мутации указывает на наличие клонального ХМПЗ и исключает возможность реактивного эритроцитоза, тромбоцитоза или миелофиброза.
 Таблица 2. Диагностические критерии ВОЗ для ХМПЗ (2008).
 В настоящее время исследование на наличие мутации JAK2 1849G/T (617V/F) - необходимое условие для установления правильного диагноза и определения дальнейшей тактики ведения пациента.

 Специальной подготовки не требуется.

 • установка или подтверждение диагноза истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитемии или идиопатического миелофиброза;
 • дифференциальная диагностика истинной полицитемии и вторичного эритроцитоза;
 • дифференциальная диагностика эссенциальной тромбоцитемии и реактивного тромбоцитоза;
 • дополнительная дифференциальная диагностика идиопатического миелофиброза и атипичных форм МПЗ;
 • дополнение к цитогенетическому и гистологическому исследованию костного мозга.
 Источник: Invitro.