ПИКСИ (PICSI)

 ПИКСИ (PICSI). Методы отбора сперматозоидов с использованием специальных сред для последующей интрацитоплазматической инъекции в ооцит. Процедура применяется у пациентов с азооспермией, астенозооспермией, олигозооспермией, тератозооспермией, низким качеством оттаявших сперматозоидов, неудачными попытками ИКСИ в анамнезе. Эта технология позволяет отбирать морфологически завершенную сперму не только под визуальным контролем (400-кратное увеличение), но и исходя из ее химических и биологических характеристик. Во время процесса PICSI генетическая зрелость сперматозоидов определяется их способностью связываться с гиалуроновой кислотой. В будущем именно эти морфологически зрелые мужские гаметы вводятся в цитоплазму яйца.

 За последнее десятилетие были достигнуты значительные успехи в лечении мужского бесплодия, главным образом благодаря созданию метода ИКСИ и его более поздней модифицированной версии, процедуры ИМСИ. Однако искусственный отбор сперматозоидов по морфологическим и кинетическим критериям не позволяет определить степень зрелости гамет и выявить дефекты ядерной ДНК. Кроме того, возможности визуальной оценки часто весьма субъективны, поскольку они полностью зависят от опыта и квалификации эмбриолога. PIXI - это инновационная репродуктивная технология, основанная на физиологическом отборе сперматозоидов с использованием гиалуроновой кислоты. Метод PIXI был разработан в 2003 году. В США профессор Г. Хуцар, который использовал гиалуроновую кислоту в качестве «биологического индикатора» зрелости сперматозоидов, позволил ему изолировать живые гамет не только с нормальной морфологией и подвижностью, но и с интактным генетическим материалом.
 Гиалуронат является основным структурным компонентом внеклеточного матрикса ооцит-кумулюсного комплекса и играет в естественных условиях роль физиологического барьера, препятствующего проникновению незрелых сперматозоидов в ооцит. Только зрелый сперматозоид, мембрана которого имеет специфические рецепторы для связывания гиалуроновой кислоты, способен достичь яйцеклетки и оплодотворить ее. PIXI является эффективным дополнением к процедуре ИКСИ и состоит в отборе отцовских гамет с самым высоким потенциалом оплодотворения путем определения их способности связываться с гиалуронатом.

Эффективность метода.

 Многочисленные клинические исследования, посвященные изучению физиологического отбора сперматозоидов с использованием гиалуроната, свидетельствуют о высокой эффективности метода ПИКСИ. Процедура PIXI позволяет отбирать и использовать в цикле ICSI зрелый и функционально компетентный сперматозоид с интактной ДНК и нормальным ядром. Было установлено, что 99% сперматозоидов, связанных с гиалуроновой кислотой, имеют лучшую морфологию и целостный генетический материал, характеризуются отсутствием или чрезвычайно низким уровнем фрагментации ДНК и демонстрируют значительное снижение частоты анеуплоидии.
 Использование мужских гамет, отобранных по методу ПИКСИ, для искусственного оплодотворения значительно улучшает качество эмбрионов, увеличивает частоту имплантации и начало беременности. Эффективность процедуры для достижения клинической беременности составляет от 30 до 36%, а частота перинатальных потерь на ранних стадиях (пропущенный аборт, самопроизвольный аборт) достаточно низкая - от 17 до 20%. Значительное увеличение эффективности оплодотворения наблюдается при одновременном отборе сперматозоидов с использованием методик PIXY и IMSI.

 Исследование пары на подготовительном этапе включает стандартные лабораторные и инструментальные исследования для всех программ ЭКО. Рекомендуемое количество предварительного обследования мужчин при планировании протокола PIKSI, в дополнение к спермограммам, общим лабораторным тестам и консультациям андролога и генетика, включает экспресс-тест HBA - анализ связывания сперматозоидов с гиалуронатом в эякуляте. родной. Тест проводится на специальном предметном стекле, поверхность которого покрыта тонким слоем гиалуроновой кислоты и состоит в расчете индекса связывания сперматозоидов путем оценки количества форм, связанных с аберонатом и не связанных. Результат этого теста позволяет эмбриологу заранее отрегулировать объем и концентрацию сперматозоидов, необходимых для получения оптимальной плотности связи во время процедуры PIXI.
 Непосредственная подготовка к циклу PIXY включает сбор и обработку гамет мужских и женских половых органов на лабораторной стадии. Протокол можно использовать самостоятельно, получить в день манипуляции или в криоконсервированных клетках, также допустимо использование донорского материала. При планировании цикла PICSI, который включает стимуляцию суперовуляции для получения большого количества зрелых периовуляторных фолликулов, назначают индивидуальный график введения индукторов фолликулогенеза в яичниках. В процессе индуцированного цикла проводится гормональный и эхографический мониторинг роста фолликулов и эндометрия. После введения триггера овуляции, трансвагинальная пункция выполняется для удаления ооцитов. Ооциты могут быть криоконсервированы, и после оттаивания их можно успешно использовать в последующих неиндуцированных циклах PIXI или других программах ЭКО.
 Непосредственно перед процедурой PIXY ооциты очищают от клеток кумулюса с использованием фермента гиалуронидазы. Плотно прилегающие клетки реактивного ободка удаляются кончиком пипетки Пастера. После ферментативной и механической обработки ооцитов под микроскопом их исследуют на степень их зрелости и отбирают только гаметы с полярным телом для оплодотворения in vitro. Эякулят собирается после 3-5 дней сексуального воздержания путем мастурбации в стерильном пластиковом контейнере. Подготовка пробы спермы для PIXY осуществляется методом всплытия (метод центробежной флотации).