Другие названия и синонимы
A marker of the development of Ph'-negative chronic myeloproliferative diseases (CMP): quantitative determination of the ratio of normal and mutant alleles 617V/617F of the JAK2 gene.Оценка результатов
Формат выдачи результата: количественный, в виде отношения уровня мутантного аллеля JAK2 1849T (617F) к уровню аллеля дикого типа JAK2 1849G (617V), выраженного в процентах.
Интерпретация результатов:
Интерпретация результатов:
| Мутация | Результаты | Комментарии |
| JAK2 1849G/T (617V/F) | НЕ ОБНАР. | Точечная соматическая мутация гена JAK2 (617V/F) не обнаружена. |
| n % | Обнаружена точечная соматическая мутация гена JAK2 (617V/F). Аллельная нагрузка составляет n %. |
Описание
Метод определения Real-Тime PCR.
Исследуемый материал Цельная кровь (с ЭДТА).
Диагностический критерий Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) для ХМПЗ. Молекулярно-генетическая диагностика. Количественное определение является важным для оценки ответа больных на терапию, для мониторинга динамики заболевания.
Миелопролиферативные заболевания (МПЗ) - заболевания, характеризующиеся избыточной пролиферацией (выработкой клеток) одного или нескольких ростков кроветворения. Нарушения возникают на уровне стволовых клеток. Классические Ph-негативные ХМПЗ - группа болезней, включающая в себя эритремию (истинную полицитемию, ИП), эссенциальную тромбоцитемию (ЭТ) и идиопатический миелофиброз (ИМФ). Это хронические лейкозы с поражением на уровне клетки-предшественницы гемопоэза с характерной для опухоли неограниченной пролиферацией этой клетки, потомки которой дифференцируются по всем росткам кроветворения. При этом для эритремии свойственно преобладание красного ростка, для эссенциальной тромбоцитемии - мегакариоцитов и тромбоцитов. Классические ХМПЗ и некоторые другие менее распространенные миелопролиферативные заболевания чаще всего являются приобретенными, спорадическими нарушениями гемопоэза.
Молекулярные события, лежащие в основе патогенеза ХМПЗ, связаны с дефектами генов, которые кодируют белки, ответственные за нормальное поддержание миелопоэза. Для всех ХМПЗ характерна аномальная тирозинкиназная активность.
Белок JAK2 принадлежит семейству нерецепторных тирозинкиназ (Janus-киназ), которое включает в себя четыре белка: JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2. Для гемопоэза особое значение среди них имеет киназа JAK2, которая осуществляет передачу сигнала не только от эритропоэтина, но и от тромбопоэтина и колониестимулирующего фактора гранулоцитов (G-CSF). Функция белков JAK заключается в том, что они служат промежуточным звеном между рецепторами на мембране клетки и сигнальными молекулами (цитокинами, факторами роста и пр. Эти молекулы, связываясь с рецепторами JAK-киназ на поверхности клетки, активируют их, что приводит к активации сигнальных путей с участием ряда белков, которые передают сигналы для транскрипции, пролиферации и дифференцировки бластных предшественников.
При появлении соматической мутации JAK2 (1849G/T (617V/F)) эти сигналы активируются автономно, независимо от связывания цитокина со своим рецептором, что приводит к избыточной пролиферации того или иного ростка клеток.
Ген JAK2 расположен в локусе 9р24.1. Соматическая мутация 1849G/T (617V/F) выражается в замене нуклеотида G→T в позиции 1849 (четырнадцатый экзон), которая в свою очередь приводит к замене фенилаланина (F) на валин (V) в 617 позиции аминокислотной последовательности белка.
JAK2 1849G/T (617V/F) является соматической мутацией, возникающей в гемопоэтических клетках-предшественницах. Она встречается у подавляющего большинства больных ХМПЗ, что делает эту мутацию очень удобным диагностическим маркером. Наличие точечной мутации JAK2 1849G/T (617V/F) - феномен, характерный исключительно для поражений миелоидного ростка, и не описан ни для солидных опухолей, ни для опухолей лимфоидного происхождения.
______________________________________________ Мутация 1849G/T (617V/F) является соматической, :
• Возникает у человека спонтанно, а не передается по наследству от родителей.
• Мутантный аллель выявляется в основном в виде гетерозиготного генотипа.
• Возможно возникновение мутации через несколько лет после проведения данного анализа, следовательно, при необходимости целесообразно повторное проведение анализа.
Таблица 1. Молекулярные аномалии, связанные с «классическими» миелопролиферативными заболеваниями.
Мутация JAK2 1849G/T (617V/F) - диагностический маркер, при помощи которого можно проводить первичную и дифференциальную диагностику ХМПЗ, а также молекулярный мониторинг минимальной остаточной болезни (количественный тест).
Алгоритм проведения молекулярной диагностики МПЗ ( 1).
Определение химерного онкогена вCR/ABL позволяет провести дифференциальный анализ хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ) и Ph-негативных МПЗ. Если в случае Ph-негативных МПЗ мутация JAK2 1849G/T (617V/F) не найдена, то в случае ИП следует осуществить поиск мутаций в двенадцатом экзоне гена JAK2, а в случае ЭТ и ИМФ - мутаций MPL W515L/K. В случае отрицательного результата следует исключить возможность наследственных дефектов генов VHL, EPO-R, PHD2, THPO, MPL и генов глобинов. При редких видах МПЗ, негативных по JAK2 V617F, целесообразно осуществить поиск химерных онкотирозинкиназ.
Сейчас молекулярное исследование входит в диагностические критерии ВОЗ 2008 г., а тест на наличие мутации JAK2 стал стандартным методом диагностики ХМПЗ. Выявление мутации указывает на наличие клонального ХМПЗ и исключает возможность реактивного эритроцитоза, тромбоцитоза или миелофиброза.
Таблица 2. Диагностические критерии ВОЗ для ХМПЗ (2008).
В настоящее время исследование на наличие мутации JAK2 1849G/T (617V/F) - необходимое условие для установления правильного диагноза и определения дальнейшей тактики ведения пациента.
Исследуемый материал Цельная кровь (с ЭДТА).
Диагностический критерий Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) для ХМПЗ. Молекулярно-генетическая диагностика. Количественное определение является важным для оценки ответа больных на терапию, для мониторинга динамики заболевания.
Миелопролиферативные заболевания (МПЗ) - заболевания, характеризующиеся избыточной пролиферацией (выработкой клеток) одного или нескольких ростков кроветворения. Нарушения возникают на уровне стволовых клеток. Классические Ph-негативные ХМПЗ - группа болезней, включающая в себя эритремию (истинную полицитемию, ИП), эссенциальную тромбоцитемию (ЭТ) и идиопатический миелофиброз (ИМФ). Это хронические лейкозы с поражением на уровне клетки-предшественницы гемопоэза с характерной для опухоли неограниченной пролиферацией этой клетки, потомки которой дифференцируются по всем росткам кроветворения. При этом для эритремии свойственно преобладание красного ростка, для эссенциальной тромбоцитемии - мегакариоцитов и тромбоцитов. Классические ХМПЗ и некоторые другие менее распространенные миелопролиферативные заболевания чаще всего являются приобретенными, спорадическими нарушениями гемопоэза.
Молекулярные события, лежащие в основе патогенеза ХМПЗ, связаны с дефектами генов, которые кодируют белки, ответственные за нормальное поддержание миелопоэза. Для всех ХМПЗ характерна аномальная тирозинкиназная активность.
Белок JAK2 принадлежит семейству нерецепторных тирозинкиназ (Janus-киназ), которое включает в себя четыре белка: JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2. Для гемопоэза особое значение среди них имеет киназа JAK2, которая осуществляет передачу сигнала не только от эритропоэтина, но и от тромбопоэтина и колониестимулирующего фактора гранулоцитов (G-CSF). Функция белков JAK заключается в том, что они служат промежуточным звеном между рецепторами на мембране клетки и сигнальными молекулами (цитокинами, факторами роста и пр. Эти молекулы, связываясь с рецепторами JAK-киназ на поверхности клетки, активируют их, что приводит к активации сигнальных путей с участием ряда белков, которые передают сигналы для транскрипции, пролиферации и дифференцировки бластных предшественников.
При появлении соматической мутации JAK2 (1849G/T (617V/F)) эти сигналы активируются автономно, независимо от связывания цитокина со своим рецептором, что приводит к избыточной пролиферации того или иного ростка клеток.
Ген JAK2 расположен в локусе 9р24.1. Соматическая мутация 1849G/T (617V/F) выражается в замене нуклеотида G→T в позиции 1849 (четырнадцатый экзон), которая в свою очередь приводит к замене фенилаланина (F) на валин (V) в 617 позиции аминокислотной последовательности белка.
JAK2 1849G/T (617V/F) является соматической мутацией, возникающей в гемопоэтических клетках-предшественницах. Она встречается у подавляющего большинства больных ХМПЗ, что делает эту мутацию очень удобным диагностическим маркером. Наличие точечной мутации JAK2 1849G/T (617V/F) - феномен, характерный исключительно для поражений миелоидного ростка, и не описан ни для солидных опухолей, ни для опухолей лимфоидного происхождения.
______________________________________________ Мутация 1849G/T (617V/F) является соматической, :
• Возникает у человека спонтанно, а не передается по наследству от родителей.
• Мутантный аллель выявляется в основном в виде гетерозиготного генотипа.
• Возможно возникновение мутации через несколько лет после проведения данного анализа, следовательно, при необходимости целесообразно повторное проведение анализа.
Таблица 1. Молекулярные аномалии, связанные с «классическими» миелопролиферативными заболеваниями.
| Генетическая аномалия | Нозология | Частота, % |
| Истинная полицитемия | 95 | |
| Эссенциальная тромбоцитемия | 50-70 | |
| Первичный миелофиброз | 40-50 |
Мутация JAK2 1849G/T (617V/F) - диагностический маркер, при помощи которого можно проводить первичную и дифференциальную диагностику ХМПЗ, а также молекулярный мониторинг минимальной остаточной болезни (количественный тест).
Алгоритм проведения молекулярной диагностики МПЗ ( 1).
Определение химерного онкогена вCR/ABL позволяет провести дифференциальный анализ хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ) и Ph-негативных МПЗ. Если в случае Ph-негативных МПЗ мутация JAK2 1849G/T (617V/F) не найдена, то в случае ИП следует осуществить поиск мутаций в двенадцатом экзоне гена JAK2, а в случае ЭТ и ИМФ - мутаций MPL W515L/K. В случае отрицательного результата следует исключить возможность наследственных дефектов генов VHL, EPO-R, PHD2, THPO, MPL и генов глобинов. При редких видах МПЗ, негативных по JAK2 V617F, целесообразно осуществить поиск химерных онкотирозинкиназ.
Сейчас молекулярное исследование входит в диагностические критерии ВОЗ 2008 г., а тест на наличие мутации JAK2 стал стандартным методом диагностики ХМПЗ. Выявление мутации указывает на наличие клонального ХМПЗ и исключает возможность реактивного эритроцитоза, тромбоцитоза или миелофиброза.
Таблица 2. Диагностические критерии ВОЗ для ХМПЗ (2008).
В настоящее время исследование на наличие мутации JAK2 1849G/T (617V/F) - необходимое условие для установления правильного диагноза и определения дальнейшей тактики ведения пациента.
Список литературы
• Абдулкадыров М., Шуваев В.А., Мартынкевич И.С. Критерии диагностики и современные методы лечения первичного миелофиброза. Вестник гематологии. М. 2013;3(9):44-78.
• Мисюрин А.В. Молекулярный патогенез миелопролиферативных заболеваний. Клиническая онкогематология. М. 2009;3(2):211-220.
• Саврилова А.М., Костерина А.В., Ахмадеев А.Р. Выявление мутации JAK2 V617F при хронических Ph-негативных заболеваниях. Генетика, Практическая Медицина. Инновационные Технологии в Медицине. М. 2014;4(14):100-102.
• Материалы фирмы-производителя тест-системы.
• Мисюрин А.В. Молекулярный патогенез миелопролиферативных заболеваний. Клиническая онкогематология. М. 2009;3(2):211-220.
• Саврилова А.М., Костерина А.В., Ахмадеев А.Р. Выявление мутации JAK2 V617F при хронических Ph-негативных заболеваниях. Генетика, Практическая Медицина. Инновационные Технологии в Медицине. М. 2014;4(14):100-102.
• Материалы фирмы-производителя тест-системы.
Подготовка
Специальной подготовки не требуется.
Показания к применению
• установка или подтверждение диагноза истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитемии или идиопатического миелофиброза;
• дифференциальная диагностика истинной полицитемии и вторичного эритроцитоза;
• дифференциальная диагностика эссенциальной тромбоцитемии и реактивного тромбоцитоза;
• дополнительная дифференциальная диагностика идиопатического миелофиброза и атипичных форм МПЗ;
• дополнение к цитогенетическому и гистологическому исследованию костного мозга;
• для оценки первоначального уровня аллельной нагрузки перед началом проведения терапии ХМПЗ;
• для оценки молекулярного ответа на проводимую терапию ХМПЗ.
Источник: Invitro.
• дифференциальная диагностика истинной полицитемии и вторичного эритроцитоза;
• дифференциальная диагностика эссенциальной тромбоцитемии и реактивного тромбоцитоза;
• дополнительная дифференциальная диагностика идиопатического миелофиброза и атипичных форм МПЗ;
• дополнение к цитогенетическому и гистологическому исследованию костного мозга;
• для оценки первоначального уровня аллельной нагрузки перед началом проведения терапии ХМПЗ;
• для оценки молекулярного ответа на проводимую терапию ХМПЗ.
Источник: Invitro.